猴組織蛋白酶ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗猴CTSK抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的猴CTSK與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗猴CTSK抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素。 抗猴CTSK抗體與結(jié)合在包被抗體上的猴CTSK結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,猴CTSK濃度與OD450值之間呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中猴CTSK的濃度。
標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個(gè)標(biāo)本量收集體積=100ul×檢測(cè)種類。
猴組織蛋白酶ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng):
1、實(shí)驗(yàn)應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀釋過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存
2、實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉感染,吸取終止液和底物A,B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混合試劑盒盒里的各種成分及樣品
6、底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴漏于光下。避免用手接,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
7、加入試劑的順序一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
8、按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。